Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros

2.50
Hdl Handle:
http://hdl.handle.net/10757/622683
Title:
Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros
Authors:
Perona, Francisco ( 0000-0001-5813-4130 ) ; Timoteo Prado, Adriana ( 0000-0002-7711-4060 )
Advisors:
Milón Mayer, Pohl Luis
Citation:
1. Perona, Francisco ( 0000-0001-5813-4130 ) ; Timoteo Prado A( 0000-0002-7711-4060 ). Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros [Internet]. Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC); 2017. Available from: http://hdl.handle.net/10757/622683
Publisher:
Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC)
Issue Date:
13-Dec-2017
URI:
http://hdl.handle.net/10757/622683
Abstract:
Introducción: El factor de iniciación IF2 tiene diferentes funciones en la iniciación de la traducción de proteínas. Su dominio C-terminal interacciona fuertemente con fMet-tRNA. El objetivo principal de este estudio es aislar un aptámero específico para IF2 CTD de Geobacillus stearothermophilus y Escherichia coli. Métodos: Se utilizó el sistema de expresión de proteínas basado en E. coli BL21. E. coli BL21 se transformó con un plásmido que contiene la secuencia InfB CTD. La inducción de proteínas se realizó bajo diferentes temperaturas y concentraciones de IPTG para cada proteína. La secuencia Hexa-His se agregó al gen infB permitiendo la purificación por cromatografía de afinidad. Resultados: IF2 CTD se purificó con alto rendimiento y pureza. La concentración de E. coli IF2 (558,0 ng/uL) fue tres veces mayor que la de G. stearothemophilus (144,6 ng/uL). Ambas proteínas se purificaron con una pureza > 95%. Mediante SELEX, se obtuvieron cuatro aptámeros para IF” CTD, de los cuales uno específicamente a IF2 CTD G. stearothemophilus. Conclusión: Se ha desarrollado un protocolo rápido y eficiente de purificación de proteína IF2 CTD, permitiendo la producción de fragmentos termofílicos y mesofílicos de IF2. El aptámero obtenido podría servir como un nuevo mecanismo inhibidor de la síntesis de proteínas en futuros estudios.
Abstract:
Introduction: The initiation factor IF2 has different functions in the initiation of protein translation. Its C-terminal domain interacts strongly with fMet-tRNA. The main objective of this study is to isolate a specific aptamer for IF2 CTD Escherichia coli and Geobacillus stearothermophilus. Methods: A protein expression system based on E. coli BL21 was used. E. coli BL21 was transformed with InfB CTD sequence. Protein induction was performed under different temperatures and IPTG concentration. His-tagged affinity chromatography was used for protein purification since a hexa-His coding sequence was added to the InfB genes. Results: IF2 CTD was purified in high yields and purity. E. coli IF2 fragment protein concentration (558.0 ng/uL) was three times larger than that of G. stearothemophilus (144.6 ng/uL). Purity of both proteins were >95%. A specific aptamer for IF2 CTD G. stearothermophilus was obtained through SELEX. Conclusion: A rapid and efficient protocol for IF2 CTD protein purification has been developed, allowing the production of thermophilic and mesophilic IF2 fragments. The obtained aptamer may serve as a novel antibiotic mechanism in further studies.
Type:
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
Rights:
info:eu-repo/semantics/embargoedAccess
Language:
spa

Full metadata record

DC FieldValue Language
dc.contributor.advisorMilón Mayer, Pohl Luises
dc.contributor.authorPerona, Franciscoes
dc.contributor.authorTimoteo Prado, Adrianaes
dc.date.accessioned2018-02-15T01:33:29Z-
dc.date.available2018-02-15T01:33:29Z-
dc.date.issued2017-12-13-
dc.identifier.citation1. Perona, Francisco ( 0000-0001-5813-4130 ) ; Timoteo Prado A( 0000-0002-7711-4060 ). Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros [Internet]. Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC); 2017. Available from: http://hdl.handle.net/10757/622683es_PE
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10757/622683-
dc.description.abstractIntroducción: El factor de iniciación IF2 tiene diferentes funciones en la iniciación de la traducción de proteínas. Su dominio C-terminal interacciona fuertemente con fMet-tRNA. El objetivo principal de este estudio es aislar un aptámero específico para IF2 CTD de Geobacillus stearothermophilus y Escherichia coli. Métodos: Se utilizó el sistema de expresión de proteínas basado en E. coli BL21. E. coli BL21 se transformó con un plásmido que contiene la secuencia InfB CTD. La inducción de proteínas se realizó bajo diferentes temperaturas y concentraciones de IPTG para cada proteína. La secuencia Hexa-His se agregó al gen infB permitiendo la purificación por cromatografía de afinidad. Resultados: IF2 CTD se purificó con alto rendimiento y pureza. La concentración de E. coli IF2 (558,0 ng/uL) fue tres veces mayor que la de G. stearothemophilus (144,6 ng/uL). Ambas proteínas se purificaron con una pureza > 95%. Mediante SELEX, se obtuvieron cuatro aptámeros para IF” CTD, de los cuales uno específicamente a IF2 CTD G. stearothemophilus. Conclusión: Se ha desarrollado un protocolo rápido y eficiente de purificación de proteína IF2 CTD, permitiendo la producción de fragmentos termofílicos y mesofílicos de IF2. El aptámero obtenido podría servir como un nuevo mecanismo inhibidor de la síntesis de proteínas en futuros estudios.es
dc.description.abstractIntroduction: The initiation factor IF2 has different functions in the initiation of protein translation. Its C-terminal domain interacts strongly with fMet-tRNA. The main objective of this study is to isolate a specific aptamer for IF2 CTD Escherichia coli and Geobacillus stearothermophilus. Methods: A protein expression system based on E. coli BL21 was used. E. coli BL21 was transformed with InfB CTD sequence. Protein induction was performed under different temperatures and IPTG concentration. His-tagged affinity chromatography was used for protein purification since a hexa-His coding sequence was added to the InfB genes. Results: IF2 CTD was purified in high yields and purity. E. coli IF2 fragment protein concentration (558.0 ng/uL) was three times larger than that of G. stearothemophilus (144.6 ng/uL). Purity of both proteins were >95%. A specific aptamer for IF2 CTD G. stearothermophilus was obtained through SELEX. Conclusion: A rapid and efficient protocol for IF2 CTD protein purification has been developed, allowing the production of thermophilic and mesophilic IF2 fragments. The obtained aptamer may serve as a novel antibiotic mechanism in further studies.es
dc.description.uriTesises_PE
dc.formatapplication/pdfes
dc.formatapplication/epubes
dc.formatapplication/mswordes
dc.language.isospaes
dc.publisherUniversidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC)es
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccesses
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.sourceUniversidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC)es_PE
dc.sourceRepositorio Académico - UPCes_PE
dc.titleProducción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeroses
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesises
thesis.degree.grantorUniversidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC). Facultad de Ciencias de la Saludes_PE
thesis.degree.levelLicenciaturaes_PE
thesis.degree.disciplineMedicinaes_PE
thesis.degree.nameMédico cirujanoes_PE
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